Édition de gènes de cellules souches et progénitrices hématopoïétiques humaines pour l’ataxie de Friedreich avec la technologie CRISPR / Cas9

Dr. Celine Rocca 1, Ms. Shi Yanmeng 1, Mr. Jay Sharma 1, Dr. Prashant Mali 1, Dr. Stephanie Cherqui 1

1. Université de Californie, San Diego

Notre objectif est maintenant de développer une greffe autologue de HSPC. Pour atteindre notre objectif, nous développons une méthode CRISPR / Cas9 pour éliminer l’expansion de la GAA dans l’intron 1 du gène de la frataxine dans les cellules HSPC des patients FRDA. Nous avons d’abord optimisé les conditions de lymphoblastes isolés de patients atteints de FRDA et obtenu jusqu’à 62% de gènes correction. Au niveau d’ARNm et de protéines, l’expression de la frataxine a atteint le même niveau que celle de leurs parents porteurs en lignées cellulaires. De plus, en utilisant une méthode très sensible développée par BIOLOG, nous avons montré que l’activité mitochondriale a également été améliorée dans la cellule corrigée. Nous nous sommes donc orientés vers le développement de la fabrication du produit humain utilisant les premières cellules CD34 + isolées à partir de sang périphérique de donneur sain. Nous avons réussi à corriger les gènes de 24 à 50% des cellules CD34 +. La capacité des cellules CD34 + modifiées par gène à se différencier en différents types hématopoïétiques les cellules de la lignée ont été testées in vitro par des dosages d’unités de formation de colonies et in vivo sur NOD scidgamma immunodéficient des souris. Enfin, nous avons modifié des gènes de cellules CD34 +, isolées chez des patients FRDA, atteignant une correction de 55% une augmentation de l’expression de la frataxine et une différenciation normale dans les différentes cellules de la lignée hématopoïétique. Avec cette étude, nous posons les fondements d’un futur essai clinique sur la transplantation autologue de HSPC pour FRDA.